幾霜::残日録::2009/05/20 (水)

　スライドの準備がまだまだ。問題は、どこまで基本的なところから説明するかというところ。そんなに難しい話でもない・・・と思うのは私だけである可能性も高いので油断できない。

　私もPhusionで同様の現象に遭ったことがあります。私の場合もバッファの影響で増幅後の溶液の粘性が高かったり、もしくは溶液中の何らかの物質の影響で失敗するのではないかと感じました。そこで、PCR後にエタ沈することで解決しました。通常のTaqの場合はPCR産物をエタ沈せずにいきなりExoSAP処理してシーケンスしていましたが、それからは特殊なバッファを使う場合はエタ沈かPEG沈してからシーケンスするようにしました。カラムやGeneCleanが使えるならそちらの方がいいでしょう。Taqでも粘性の高いバッファ(NEBのThermoPolバッファとか)を使う場合は同様にしていました。ただ、ThermoPolバッファの方がStandardバッファより成功率が低かったので、そのうちほとんどはStandardバッファを使うようになりましたが。Ex-Taqと付属バッファではそのままExoSAPで問題無かったと思います。